Aspectos Pré-Analíticos Agregação Plaquetária

Transcrição

1 Aspectos Pré-Analíticos Agregação Plaquetária Tânia Siegl Machado Laboratório de Hemostasia

2 Sumário Introdução Aspectos pré-analíticos na execução do teste Considerações finais

3 Introdução Princípios básicos do teste de agregação plaquetária Transmissão de luz basal Agente Agregante Aumento da transmissão de luz PRP Agregados Plaquetários McCabe, White; Jennings, Lisa K. ; Platelet Protocols

4 Aspectos pré-analíticos

5 Importância da história clínica Anamnese e exame clínico Doenças associadas à disfunção plaquetária e história de uso de medicamentos

6 Orientações ao paciente Jejum de 4 horas Não fumar3 horas antes Não praticar exercícios físicos e ingestão de bebida alcóolica 24 horas antes 10 dias antes do teste não ingerir medicamentos que contêm aspirina, a não ser que seu efeito sobre as plaquetas esteja sendo investigado Componentes que fazem parte da dieta normal quando ingeridos em excesso como açafrão, cebola, alho, gengibre e álcool podem diminuir a agregação plaquetária CLSI - Clinical and Laboratory Standards Institute (Volume 28 H-58A)

7 Orientações ao paciente : Interferência de medicamentos Antiinflamatórios não esteroidais e esteroidais, antibióticos, antidepressivos, anti-histamínicos, diuréticos, vasodilatadores, betabloqueadores, bloqueadores de canal de cálcio, fórmulas medicinais e compostos naturais podem interferir no teste Suspensão deve ser confirmada pelo médico do paciente Devem ser informados ao laboratório CLSI - Clinical and Laboratory Standards Institute (Volume 28 H-58A)

8 Drogas, alimentos e complementos que interferem na função plaquetária Agente Abciximab (ReoPro) Ticlopidina, Clopidogrel Epoprostenol Antiinflamatórios não esteroidais AAS Bloqueadores de canais de cálcio Antidepressivos tricíclicos, fluoxetina Estatinas Anestésicos Fenotiazínicos Óleos de peixe Vitamina E, Cebola Mecanismo de Ação Inibição GPIIb-IIIa Inibição receptores de ADP Ativação da adenil ciclase Inibição da geração de TXA2 Inibição da geração de TXA2 Inibição dos canais de cálcio Inibição da captação de serotonina Interferência na via de sinalização Diminuição da agregação Diminuição da agregação Redução da geração de TXA2 Inibição do metabolismo do AA World Federation of Hemophilia (

9 Análise quantitativa e morfológica das plaquetas Hemograma Completo Contagem plaquetária Volume plaquetário médio(vpm) Distribuição das plaquetas por tamanho(pdw) Avaliação morfológica das plaquetas Avaliação de inclusões em neutrófilos Plaquetopenias observar se hápresença de agregados plaquetários (trombocitopenia in vitro com EDTA -correção com anticoagulante citrato 3,2%)

10 Megaplaquetas Sd Bernard Soulier Agregados plaquetários com EDTA Plaqueta normal

11 Coleta das amostras Tubos Plástico ou vidro siliconizado evitar a adesão e ativação das plaquetas Anticoagulante Citrato de sódio 3.2% /1:9 (1 parte de anticoagulante: 9 partes de sangue ) Hematócrito > 55% correção do volume de anticoagulante Punção Excesso de manipulação da agulha danifica o tecido causando maior exposição do subendotélio liberação de fator teciduale ativação plaquetária Mínimo de oclusão venosa Adultos - agulhas de calibre 21 (< lesão tecidual e hemólise) Crianças -agulhas de calibre 23 CLSI - Clinical and Laboratory Standards Institute (Volume 28 H-58A)

12 Transporte das amostras O método como érealizado impacta diretamente a integridade da amostra. Fatores relevantes : Temperatura ambiente ( 20 C - 25 C) Modo de transporte Tubos na vertical Evitar vibrações (hemólise e ativação plaquetária) Se necessário acondicionar em plástico bolha para transporte veicular. Tempo máximo entre coleta e execução do teste 2 horas CLSI - Clinical and Laboratory Standards Institute (Volume 28 H-58A)

13 Processamento da amostra de PRP e PPP Preparação das amostras (temperatura ambiente) : Centrifugação do PRP 200 g por 10 min transferência do PRP em tubo plástico tampado contagem de plaquetas Centrifugação do PPP 2500 g por 15 minutos transferência do PPP em tubo plástico Contagem de plaquetas no PRP: x 10³ Não diluir o PRP (interferência émínima) A diluição do PRP com PPP pode inibir a resposta plaquetária devido a liberação de substâncias das plaquetas durante a alta centrifugação para obtenção do PPP Assim: Correção com PPP apenas seprp > 600x10³plaquetas. Plaquetopenia (< 100 x 10³ plaquetas no PRP) Se indicada a realização do teste, a análise deve levar em conta esta informação Papel de valores de referência com plaquetopenia é incerto Cattaneo et al. 2007, Linnemann et al CLSI - Clinical and Laboratory Standards Institute (Volume 28 H-58A); Kitchen, Steve; McCraw, Angus Diagnosis of Hemophilia and Other Bleeding Disorders

14 Interferentes na execução do teste Anticoagulante Tempo Centrifugação Contagem plaquetária ph Velocidade da stir bar Hematócrito 1:9 citrato trissódico (0,109M) Início min após a preparação do PRP Tempo máximo entre coleta e execução de 2 horas Deve ser suficiente para remover hemácias e leucócitos, mas não as plaquetas e feita a temperatura ambiente Baixa contagem < 100x10³- Respostas ineficientes Alta contagem > 1000x10³- Respostas reduzidas < ph 7.7 inibição da agregação > ph 8.0 aumento da agregação < 800 rpm redução da agregação > 1200 rpm destrói os agregados plaquetários > 55% gera uma diminuição da agregação progressivamente, levando a uma inibição da segunda fase devido ao aumento da concentração de citrato Kitchen, Steve; McCraw, Angus; Diagnosis of Hemophilia and Other Bleeding Disorders

15 Interferentes na execução do teste Temperatura do agregômetro Lipemia Cuvetas sujas Ausência da stir bar < 35 C diminuição da agregação plaquetária com doses regulares de todos os agonistas, mas aumento na resposta com baixa dose de ADP Aumento de quilomicrons causa redução da agregação Pode causar agregação espontânea Não há resposta na adição do agente agregante Kitchen, Steve; McCraw, Angus; Diagnosis of Hemophilia and Other Bleeding Disorders

16 Dificuldades de padronização Diferentes concentrações usadas em cada protocolo Variedade de reagentes Padronização dos valores de referência Utilização de um controle normal diário Estabalecimento de valores de referência locais

17 Experiência local com coleta àvácuo e PRP sem diluição ADP 5uM Adre 5uM Colágeno 2ug Rist 1,25mg AA 0,5Mm Média(%) 81,63 79,10 81,67 89,00 85,02 2DesvPad 63,44-99,81 62,22-95,86 65,24-98,10 72,52-105,4 69,1-100,95 Coef. Variação 0,13 0,13 0,11 0,12 0,09 Laboratório de Hemostasia Hemocentro UNICAMP

18 Histogramas dos agentes agregantes Adrenalina 5µM ADP 5µM Colágeno 2µg/ml Ristocetina 1,25 mg/ml Laboratório de Hemostasia Hemocentro UNICAMP

19 Conclusões Variáveis pré-analíticas são muito importantes na realização e na análise do teste de agregação plaquetária História sobre uso de medicamentos deve ser colhida de forma cuidadosa e considerada na análise dos resultados Coleta em tubos àvácuo e processamento sem diluição são factíveis

20 Obrigada Tânia Siegl Machado