AULA PRÁTICA N O 1. Microbiologia INTRODUÇÃO AO LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA, MICROSCOPIA E CÉLULAS MICROBIANAS EUCARIÓTICAS E PROCARIÓTICAS

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1 Av. Vitória, 950 Forte São João Vitória-ESTel.: (27) AULA PRÁTICA N O 1 Microbiologia EXCELÊNCIA UNIVERSITÁRIA NA FORMAÇÃO DE PROFISSIONAIS COMPROMETIDOS COM A VIDA E A TRANSFORMAÇÃO SOCIAL. INTRODUÇÃO AO LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA, MICROSCOPIA E CÉLULAS MICROBIANAS EUCARIÓTICAS E PROCARIÓTICAS 1. INTRODUÇÃO Microbiologia pode ser definida como o estudo de organismos muito pequenos para serem vistos claramente e individualizados pelo olho humano sem ajuda nenhuma. Para a manipulação e visualização de microrganismos são necessários equipamentos e utensílios de laboratório. Dentre os equipamentos que permitiu o avanço dos estudos em microbiologia está o microscópio, o qual permite o aumento e ampliação das células. O termo microscópio deriva do latim, micro, que significa pequeno; e do grego skopos, que significa olhar. Apesar dos microrganismos não poderem ser observados a olho nu, eles constituem uma fração considerável da biomassa na terra e são importantes em todos os ecossistemas. Os microrganismos podem causar efeitos benéficos ou maléficos para os seres humanos. O grande objetivo dos microbiologistas é otimizar a utilização dos microrganismos benéficos e identificar maneiras de controlar o crescimento dos maléficos. Os microrganismos podem se diferenciar quanto ao tamanho da célula, constituintes celulares e atividades metabólicas (quadro 1). Em termos celulares, os microrganismos podem ser classificados como procariontes, constituídos por células mais simples, sem núcleo organizado e organelas membranosas (ex.: bactérias e archeas); e como eucariontes, organismos constituídos por citoplasma e núcleo separados por uma membrana chamada carioteca, além da presença de organelas membranas (ex.: plantas, animais, fungos, protozoários e algas). Devido à facilidade de contaminação dos experimentos microbiológicos, as pesquisas realizadas no laboratório devem ser conduzidas com especial atenção para evitar resultados falsos.

2 Quadro 1. Principais diferenças entre células procarióticas e eucarióticas. 2. PRINCÍPIOS BÁSICOS DE MICROSCOPIA ÓPTICA 2.1 Constituição do Microscópio Óptico Comum Atualmente, o microscópio óptico composto (M.O.C.) é constituído por duas partes uma parte mecânica e uma parte óptica. Cada parte engloba uma série de componentes constituintes do microscópio (figura 1). A parte mecânica serve para dar estabilidade e suportar a parte óptica. Esta parte é constituída por: Pé ou Base suporta o microscópio, assegurando a sua estabilidade. Braço ou Coluna peça fixa à base, na qual estão aplicadas todas as outras partes constituintes do microscópio. Tubo ou Canhão cilindro que suporta os sistemas de lentes, localizando-se na extremidade superior a ocular e na inferior o revólver com objetivas.

3 Platina peça circular, quadrada ou retangular, paralela à base, onde se coloca a preparação a observar, possuindo no centro um orifício circular ou alongado que possibilita a passagem dos raios luminosos concentrados pelo condensador. Figura 1. Componentes de um microscópio óptico comum. Parafuso Macrométrico engrenagem que suporta o tubo e permite a sua deslocação a da platina. É indispensável para fazer a focagem. Parafuso Micrométrico imprime ao tubo ou à platina movimentos de amplitude muito reduzida, completando a focagem. Permite explorar a profundidade de campo do microscópio. Revólver disco adaptado à zona inferior do tubo, que suporta duas a quatro objetivas de diferentes ampliações: por rotação é possível trocar rápida e comodamente de objetivas. A parte óptica é constituída por: Sistema de Oculares e Sistema de Objetivas o conjunto de lentes que permitem a ampliação do objeto. A ampliação dada ao microscópio é igual ao produto da ampliação da objetiva pela ampliação da ocular. Fonte Luminosa existem vários tipos de fontes luminosas, podendo ser uma lâmpada (iluminação artificial), ou um espelho que reflita a luz solar (iluminação natural).

4 Condensador distribui regularmente, no campo visual do microscópio, a luz refletida pelo espelho. Diafragma regula a intensidade luminosa no campo visual do microscópio. Devido a estes componentes serem de alta precisão e porque o microscópio é um instrumento caro, requer cuidados especiais de transporte, utilização e manutenção Posição do Observador - O observador deve estar sentado. - Se o M.O.C. possuir uma ocular deve olhar por ela com o olho esquerdo, mantendo os dois olhos abertos. Se o M.O.C. tiver duas oculares, deve olhar por ambas. - Os parafusos de comando devem ser manuseados com a mão esquerda, deixando a mão direita livre para desenhar as observações Focalização - Colocar a ocular desejada; - Acender a fonte de luz acoplada; - Posicionar o condensador o mais próximo possível da platina; - Verificar se o diafragma está completamente aberto; - Colocar em foco a objetiva de menor aumento; - Fixar a lâmina preparada para observação na platina, através das presilhas; - Observar o campo microscópico; - Ajustar o foco utilizando o parafuso macrométrico. - Para maior aumento trocar as objetivas e ajustando o foco com o parafuso macrométrico e se necessário o micrométrico; - Para observar a lâmina corada com a objetiva de imersão, colocar uma gota de óleo de cedro sobre a área corada da lâmina; - Girar o revolver colocando a objetiva de imersão (maior aumento) em foco; - Olhando pelo lado, descer o canhão (ou subir a mesa de platina) utilizando o parafuso macrométrico até que a lente da objetiva de imersão encoste no óleo de cedro. NUNCA focalizar a imagem pela objetiva de imersão olhando pela ocular e sim sempre pelo lado;

5 - Olhando pela ocular, girar o parafuso macrométrico LENTAMENTE, até conseguir focalizar de formar grosseira a preparação; - Mover o parafuso micrométrico até conseguir uma focalização ideal; - Para mudar o campo microscópico a ser observado, mover o charriot; Cuidados a ter com o M.O.C. - Deve-se pegar no M.O.C. pelo braço, com a mão direita, enquanto se suporta a base com a mão esquerda; - Não se deve tocar no sistema óptico com os dedos; - A lente das objetivas não deve tocar na lamela; - O M.O.C. deve estar completamente pousado numa mesa desocupado, e afastado da borda da mesa. 3. OBJETIVOS A- Identificar os materiais, equipamentos e normas do laboratório de microbiologia; B- Conhecer e manusear as partes integrantes de um microscópio óptico e suas funções; C- Identificar células procarióticas. 4. MATERIAIS Microscópio; Óleo de imersão; Papel absorvente para a limpeza das lentes; Uma lâmina com cocos gram-positivo corada pelo método de Gram; Uma lâmina com bacilos gram-negativo corada pelo Gram; Uma lâmina com bacilos gram-positivo corada pelo Gram; Bico de busen; Alça de inoculação de platina; Alça de inoculação descartável estéril; Álcool etílico 70%;

6 Luvas de procedimento; Pipetas de 10ml; Proveta de 100ml; Placa de petri com Agar Cled com E. coli semeada; Placa de petri com Agar Cled; Swab estéril; Tubos de ensaio; Erlenmeyer; Balão de fundo chato; Contador de colônias. 5. PROCEDIMENTO 5.1 Microscopia Seguir o item Focalização. 5.2 Materiais de laboratório de microbiologia Reconhecer a função e desenhar os materiais básicos de laboratório de microbiologia. 5.3 Células procarióticas Seguir os procedimentos de visualização em microscópio óptico; Reconhecer as células procarióticas e eucarióticas; Verificar as principais diferenças entre os tipos celulares.

7 6 RESULTADOS 6.1 MICROSCOPIA Colocar os nomes das partes do microscópio nas setas e números correspondentes: 6.2 MATERIAIS DE LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA Desenhar os principais materiais de laboratório de microbiologia observados na aula prática

8 CÉLULAS PROCARIÓTICAS E EUCARIÓTICAS Esquematizar as células observadas

9 REFERÊNCIAS NEDER, R. N. Microbiologia: Manual de Laboratório. São Paulo: Novel, p 138. PELCZAR, M., CHAN, E. C. S., KRIEG, N. R. Microbiologia, Conceitos e Aplicações. São Paulo: Makron Books do Brasil, v.1, p TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R. CASE, C. L. Microbiologia. Artmed, 9 ed., Porto Alegre p.