UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA CÂMPUS DE JABOTICABAL FACULDADE DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS E VETERINÁRIAS. Conceitos importantes para aulas práticas

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1 unesp UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA CÂMPUS DE JABOTICABAL FACULDADE DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS E VETERINÁRIAS Conceitos importantes para aulas práticas Disciplina Bioquímica I Curso Agronomia Responsáveis: Profa. Dra. Lucia Maria Carareto Alves Março

2 1 REGRAS PARA UTILIZAÇÃO DE UM LABORATÓRIO DIDATICO Todo e qualquer trabalho a ser desenvolvido dentro de um laboratório apresenta riscos, seja por produtos químicos, chama, eletricidade ou imprudência do próprio usuário, que pode resultar em danos materiais ou acidentes pessoais e que podem acontecer quando menos se espera. Pensando nisto, elaboramos este texto, contendo as principais medidas e comportamento que se fazem necessárias para a utilização de um laboratório didático. Prevenir acidentes é dever de cada um, portanto trabalhe com calma, cautela, dedicação e bom senso, seguindo sempre as recomendações aqui descritas, desta forma prevenindo e/ou minimizando os efeitos nefastos resultantes dos possíveis acidentes. Regras gerais 1. Apenas é permitida a entrada de pessoas autorizadas nos laboratórios ou salas de preparo. 2. Nunca trabalhar sozinho no laboratório. É conveniente fazê-lo durante o período de aula ou na presença do instrutor e/ou professor. 3. Usar o jaleco de mangas compridas, sempre que estiver dentro de um laboratório, mesmo que não esteja trabalhando. 4. Utilizar os equipamentos de proteção individual (luvas, touca, mascara, etc) de acordo com a orientação do professor e/ou monitor. 5. Não é permitido beber, comer, fumar ou aplicar cosméticos dentro do laboratório, em decorrência do alto risco de contaminação. 6. Utilizar roupas e calçados adequados que proporcionem maior segurança, tais como: calças compridas e sapatos fechados. 7. Tomar os devidos cuidados com os cabelos, mantendo-os presos e/ou uso de touca. 8. Ler sempre o procedimento experimental com a certeza de ter entendido todas as instruções. Em caso de dúvidas, ou se algo anormal tiver acontecido, chame o professor ou monitor imediatamente. 9. Para utilizar-se de produtos químicos ou qualquer equipamento, é necessário auxílio e autorização de professores ou monitores. 10. Manter sempre limpo o local de trabalho, evitando obstáculos que possam dificultar as análises. 11. Não trabalhar com material imperfeito, principalmente vidros que tenham arestas cortantes. Todo material quebrado deve ser desprezado. 12. Não deixar sobre a bancada, vidros quentes e frascos abertos. 13. Utilizar óculos de segurança quando se fizer necessário. 14. Usar luvas apropriadas durante a manipulação de objetos quentes e de substâncias que possam ser absorvidas pela pele (corrosivas, irritantes, cancerígenas, tóxicas ou nocivas). 15. Caso você tenha alguma ferida exposta, esta deve estar devidamente protegida. 16. Em caso de acidentes, avise imediatamente o professor ou monitor responsável.

3 17. Cada equipe é responsável pelo seu material, portanto, ao término de uma aula prática, tudo o que você usou deverá ser limpo e guardado em seus devidos lugares. 18. Quando houver quebra ou dano de materiais ou aparelhos, comunique imediatamente aos professores ou ao monitor responsável. 19. Na falta de algum material, a equipe ficará responsável pela sua reposição. 20. Não utilizar o material de outra equipe. 21. Não fazer uso de materiais ou equipamentos que não fazem parte da aula prática. 22. O material disponível no laboratório é de uso exclusivo para as aulas práticas, por isso não promova brincadeiras com ele. 23. Em caso de empréstimos de materiais, deverá haver autorização do monitor responsável mediante assinatura do termo de responsabilidade. 24. Laboratório é local de trabalho sério e não fuga de aulas teóricas, por isso desenvolva a responsabilidade e o profissionalismo. 25. O não cumprimento destas normas poderá acarretar punição ao aluno ou à equipe. 2 Laboratório de Bioquímica A Bioquímica é o ramo da ciência que estuda a química dos seres vivos. Essa área de conhecimento apresenta pontos de contato com as Ciências Físicas, a Fisiologia e a Química. A Bioquímica é tão ampla que já comporta muitas subespecialidades, estuda todos os tipos de seres vivos e sua finalidade última seria alcançar o entendimento completo do processo vital em termos moleculares. Para utilizar este laboratório, algumas normas fazem-se necessárias: 1. Cumpra as regras gerais. 2. Use sempre uma pipeta para cada reagente, a fim de evitar contaminações. 3. Não troque as tampas dos reagentes. 4. Para aquecer o tubo de ensaio na chama direita (no bico de Busen e/ou lamparina), observe se o tubo está seco pelo lado de fora. 5. Espere sempre que o vidro quente volte a esfriar antes de pegá-lo. Lembre-se: o vidro quente sempre parece estar frio. 6. Terminando o uso do bico de Bunsen, verifique se as torneiras do gás estão bem fechadas, evitando assim explosões e intoxicações. 7. Nunca deixe ou abra frascos de líquidos inflamáveis (éter, álcool, acetona, benzeno, etc.) nas proximidades de chamas. 8. Nunca devolva a solução para o frasco estoque, pois esta pode estar contaminada. 9. Antes de introduzir pipetas nas soluções, certifique-se de que estão limpas. 10. Para preparar soluções de ácidos fortes (como o sulfúrico, clorídrico, nítrico), verta sempre o ácido sobre a água nunca a água sobre o ácido para evitar reação exotérmica violenta. 11. Para preparo das soluções alcalinas (NaOH, KOH, entre outras), tome bastante precaução, pois a reação é exotérmica e corrosiva. Mantenha o frasco em banho de gelo para evitar quebras. Não aspire os vapores desprendidos.

4 12. Para verificar o odor da substância, nunca leve o rosto diretamente sobre o frasco. 13. Quando pipetar sangue, ácido concentrado ou soluções alcalinas concentradas, lavar imediatamente com água o material utilizado. 14. Não troque os reagentes de uma mesa para outra. 15. No final de cada aula, limpe todo o material. Passe água de torneira nos tubos e outros materiais utilizados. 16. Faça o descarte de acordo com as instruções dadas pelo professor ou pelo monitor. 17. Não jogue nada na pia sem a autorização do professor e/ou monitor. 3 VIDRARIAS DE USO GERAL EM UM LABORATÓRIO ALMOFARIZ COM PISTILO - Usado na trituração e pulverização de sólidos. BALÃO DE FUNDO CHATO - Utilizado como recipiente para conter líquidos ou soluções, ou mesmo, fazer reações com desprendimento de gases. Pode ser aquecido sobre o TRIPÉ com TELA DE AMIANTO BALÃO DE FUNDO REDONDO - Utilizado principalmente em sistemas de refluxo e evaporação a vácuo, acoplado a ROTAEVAPORADOR CONDENSADOR - Utilizado na destilação e tem como finalidade condensar vapores gerados pelo aquecimento de líquidos

5 4 BALÃO VOLUMÉTRICO - Possui volume definido e é utilizado para o preparo de soluções em laboratório. BECKER - É de uso geral em laboratório. Serve para fazer reações entre soluções, dissolver substâncias sólidas, efetuar reações de precipitação e aquecer líquidos. Pode ser aquecido sobre a TELA DE AMIANTO. CADINHO - Usado para calcinação (aquecimento a seco muito intenso) de substâncias. Pode ser aquecido diretamente na chama do bico de Bunsen, apoiado sobre triângulo de porcelana, platina, amianto etc PROVETA OU CILINDRO GRADUADO - Serve para medir e transferir volumes de líquidos. Não pode ser aquecida. KITASSATO - Utilizado em conjunto com o FUNIL DE BUCHNER em FILTRAÇÕES a vácuo. FUNIL DE BUCHNER - Utilizado em filtrações a vácuo. Pode ser usado com a função de FILTRO em conjunto com o KITASSATO - A filtração a vácuo acelera o processo de filtração

6 5 ERLENMEYER - Utilizado em titulações, aquecimento de líquidos e para dissolver substâncias e proceder reações entre soluções. Em Microbiologia é usado para o cultivo in vitro de microrganismos FUNIL DE SEPARAÇÃO - Utilizado na separação de líquidos não miscíveis e na extração líquido/líquido. FUNIL - Usado na filtração e para retenção de partículas sólidas. Não deve ser aquecido. BURETA - Aparelho utilizado em análises volumétricas. Titulometria PIPETAS PIPETA GRADUADA - Utilizada para medir pequenos volumes. Mede volumes variáveis. Não pode ser aquecida. 2 - PIPETA VOLUMÉTRICA - Usada para medir e transferir volume definidos de líquidos. Não pode ser aquecida, pois possui grande precisão de medida 3 -PIPETA PASTEUR - Usada para transferir líquidos. Possui ou é acoplada a um bulbo e não tem precisão.

7 6 4 - PIPETA AUTOMATICA OU MICROPIPETADOR - Utilizada para medir pequenos volumes. Mede volumes variáveis. Necessita da colocação de uma ponteira descartável que tem a função de captar o liquido a ser utilizado. VIDRO DE RELÓGIO - Peça de Vidro de forma côncava é usada em análises e evaporações. Não pode ser aquecida diretamente. TUBO DE ENSAIO - Empregado para fazer reações em pequena escala, principalmente em testes de reação em geral. Pode ser aquecido com movimentos circulares e com cuidado diretamente sob a chama do BICO DE BÜNSEN. ESTANTE PARA TUBO DE ENSAIO - É usada para suporte dos TUBOS DE ENSAIO BICO DE BÜNSEN - É a fonte de aquecimento mais utilizada em laboratório. Mas contemporaneamente tem sido substituído pelas MANTAS E CHAPAS DE AQUECIMENTO TELA DE AMIANTO - Suporte para as peças a serem aquecidas. A função do amianto é distribuir uniformemente o calor recebido pelo BICO DE BUNSEN TRIPÉ - Sustentáculo para efetuar aquecimentos de soluções em vidrarias diversas de laboratório. É utilizado em conjunto com a TELA DE AMIANTO. SUPORTE UNIVERSAL - Utilizado em operações como: Filtração, Suporte para Condensador, Bureta, Sistemas de Destilação, etc. Serve também para sustentar peças em geral.

8 7 CONJUNTO PARA AQUECIMENTO DE SOLUÇÕES OU ÁGUA PINÇA METÁLICA - Usada para manipular objetos aquecidos. 2 - PINÇA DE MADEIRA - Usada para prender TUBO DE ENSAIO para o aquecimento. PISSETA OU FRASCO LAVADOR - Usada para lavagens de materiais ou recipientes através de jatos de água, álcool ou outros solventes. UNIDADES DE MEDIDA Servem para definir dimensões (massa, volume, comprimento, área, concentração Para cada uma das dimensões existe uma unidade primária adequada e definida Massa grama (g) Volume - cm 3 ou mililitro (ml) Comprimento - metro (m) Área cm 2 Densidade g/ml Unidades primárias podem ser muito grandes ou muito pequenas para expressar uma medida, portanto existem as unidades secundárias. Para se obter a unidade secundária multiplica-se a unidade primária por uma potência de 10 e adiciona os prefixos abaixo de acordo com a potencia usada. Quilo (k) 10 3

9 8 Deca (dc) 10 Deci (d) 10-1 Centi (c) 10-2 Mili (m) 10-3 Micro ( ) 10-6 Nano (n) 10-9 Pico (p ) Exercícios 1. Transformar as unidades. a) 0,2 ml = ul b) 1 L = dl c) 32 g = mg d) 200g = Kg e) 68 ul = ml f) 1 ng = pg 2. Transformar as unidades de concentração a) 2 g / L = mg/ml b) 27 mg/ul = mg/ml c) 39 dg/l = mg/l d) 150 kg/l = g/ml Unidades de concentração mais usadas em bioquimica Descreve as proporções entre peso:volume, peso:peso ou volume:volume Proporções em % - X g soluto /100 g solvente(~100ml) ou XmL soluto/ 100 ml do solvente Molaridade = M = Peso molecular em gramas (mol) / litro Normalidade = N = equivalente grama / litro Equivalente grama = mol / número de íons para doar/receber Exercícios 1. Como fazer 1 litro de cada uma das soluções de NaCl: a) 0,65% d) 25% b) 1% e) 40% c) 2,9% 2. Como fazer 1 litro de cada uma das soluções de NaCl partindo de uma solução a 50% a) 0,65% d) 25% b) 1% e) 40% c) 2,9% 3. Como fazer 1 litro de cada uma das soluções de glicose: a) 1M b) 2,5 mm

10 9 c) 0,1M d) 500mM e) 0,5M 4. Qual a concentração molar de uma solução de sacarose contendo: a) 342,3 g/l b) 120 mg/ml c) 0,342mg/L 5. Determinar a concentração em g/ml das soluções: a) Glicina 0,5mM b) Asparagina 1µM c) Glutamato de sodio 3M 6. Como fazer uma solução 1N de : a) NaOH (PM = 40) b) Ba(OH)2 (PM = 171,38) c) HCl (PM = 36,46 d = 1,19 P = 37%) d) H 2 SO 4 (PM = 98,08 d = 1,84 P = 98%) Dados importantes para a resolução dos exercícios Glicose (PM=180,16) NaCl (PM=58) Sacarose (PM=342,3) NaOH (PM = 40) Glicina (PM=75,07) Ba(OH)2 (PM = 171,38) Asparagina (PM=132,12) HCl (PM = 36,46 d = 1,19 P = 37%) Glutamato de sódio (PM=187,13) H 2 SO 4 (PM = 98,08 d = 1,84 P = 98%) COMO FAZER UM RELATÓRIO CIENTÍFICO Um relatório científico deve conter os itens: Introdução Objetivo Metodologia Resultados Discussão Conclusão Referências bibliográficas Introdução Fundamentação teórica Esta parte é dedicada à justificativa dos ensaios e às consultas bibliográficas expondo dados existentes na literatura especializada, que fundamentem melhor o assunto a ser tratado na parte experimental

11 Objetivo No objetivo deve-se explicar o que se pretende com o ensaio. Normalmente ele inicia-se com um verbo e deve ser o mais definido possível. Metodologia Relaciona-se aqui o material utilizado incluindo os reagentes, vidrarias ou outros materiais importantes para o desenvolvimento do ensaio experimental. A respeito dos reagentes é importante citar suas concentrações e a marca dos mesmos se isso for relevante para a execução do ensaio. A metodologia deve ser detalhada e cada etapa descrita com precisão. Se necessário usar gráficos, organogramas e ilustrações adequadas. Resultados e Discussão Durante o ensaio é preciso anotar cuidadosamente todas as mudanças observadas, não desprezando nenhum pormenor, pois os pormenores podem ser importantes para a interpretação dos resultados. As observações devem ser descritas na forma de figuras, tabelas e gráficos de forma a facilitar a observação como um todo. Comparações dos resultados observados devem ser feitas com dados de literatura se estiverem de acordo ou não com a teoria. Conclusão Essa é a etapa que finaliza a discussão de forma objetiva e clara. É a síntese do experimento em que são enfatizados os dados que fundamentam os objetivos se estes tiverem sido plenamente alcançados. Referências bibliográficas As referências bibliográficas são fundamentais para comparação dos dados obtidos. Ela deve ser completa descrevendo o nome da obra, autor, edição, editora, volume, pagina e ano de publicação. 10