Anais. Naviraí/MS - Brasil. Organização. Coordenação. Comitê Científico

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Patrícia Lobo Casqueira
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1 Organização Universidade Estadual de Mato Grosso do Sul Gerência da Unidade de Naviraí Coordenação do Curso de Química Coordenação do Curso de Tecnologia em Alimentos Coordenação Prof. Dr. Alberto Adriano Cavalheiro Prof. Dr. Ademir dos Anjos Anais Comitê Científico Prof. Dr. Euclésio Simionatto Prof. Dr. Rogério César de Lara da Silva Prof. Dr. Sandro Minguzzi Prof. Ms. Jusinei Meireles Stropa Profa. Ms. Simone Cândido Ensinas 29 de outubro a 1 de novembro de 2014 Naviraí/MS - Brasil 0

Dr. Euclésio Simionatto Prof. Dr. Rogério César de Lara da Silva Prof. Dr. Sandro Minguzzi Prof. Ms.

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3 78 Com uma micropipeta volumétrica transferiu-se 50 µl de cada concentração para balões volumétricos, adicionando a solução de DPPH já preparada até completar o volume, as soluções foram reservadas por 30 min e após feito a leitura das absorbâncias no comprimento de onda de 517 nm em cubetas de quartzo de caminho óptico de 1 cm, tendo como branco a solução de metanol preparada. Feito isso foi calculado a porcentagem de inibição da amostra e o resultados jogados no Excel para o construção dos gráficos e formulação da equação da reta e assim, calcular o índice de concentração inibitória de 50% (IC 50 ). A determinação do teor de fenóis totais presentes nas amostras foi realizada por meio da espectroscopia na região do visível utilizando o método de Folin-Ciocalteu (SOUZA, 2007). Onde se pesou 5 mg de cada fração dissolvendo-as em metanol, transferindo para um balão volumétrico de 5 ml completando o volume com metanol. Uma alíquota de 100 µl de cada fração foi transferida para balões volumétricos de 5 ml onde foi acrescentado 1 ml de água destilada, 0,2 ml do reagente folin-ciocalteu, 0,6 ml da solução de 20% de Na 2 CO 3 completando o volume com água destilada. As amostras foram reservadas por 90 min e após feito a leitura das absorbâncias em comprimento de onda de 750 mn em cubetas de quartzo de caminho óptico de 1 cm, tendo como branco todos os reagentes exceto a amostra. O teor de fenóis totais (FT) foi determinado por interpolação da absorbância das amostras contra uma curva de calibração construída com padrões de ácido gálico (50 a 500 µg/ml) e expressos como mg de EAG (equivalentes de ácido gálico) por mg de extrato. As folhas frescas de Microlobius foetidus foram submetidas a vários processos de hidrodestilação por quatro horas em aparelho tipo Clevenger. No procedimento a SPME, a fibra utilizada foi Niti-ZrO 2 -PDMS 35 µm, sendo utilizados 100 mg de folha, com um tempo de 30 minutos e extração, e temperatura de extração a 40 C. As análises foram realizadas por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM) em um sistema Varian GC-MS-MS, equipado com um cromatógrafo gasoso Varian , equipado com coluna capilar ZB-5, injetor automático CP-8410, acoplado a um espectofotômetro de massas Varian Saturn 2100, operando com impacto de elétrons de 70 ev. RESULTADOS E DISCUSSÃO As frações hexânica, acetato de etila e clorofórmio foram aplicados sobre a placa cromatográfica, onde os resultados são apresentados na Figura 1, onde é possível observar que o resultado não foi significativo, pois apresentou uma mudança mínima na coloração, indicando uma baixa atividade, pois os resultados se tornam significantes quando ocorre a mudança de coloração do violeta para o amarelo intenso. O teste antioxidante quantitativo foi realizado com as frações hexânica, acetato de etila e clorofórmio, onde foi realizada a leitura das absorbancias das amostras. Feito isso, foi calculado a porcentagem de inibição de toda as concentrações e os resultados obtidos foram jogados no Excel para a construção dos gráficos e formulação da equação da reta, feito isso foi calculado o IC 50 de cada amostra (Tabela 1). Figura 1: Placa cromatográfica com as frações analisadas. Estudos Químicos e Biológicos da Microlobius foetidus

Feito isso foi calculado a porcentagem de inibição da amostra e o resultados jogados no Excel para o construção dos gráficos e formulação da equação da reta e assim, calcular o índice de concentração

4 79 Após o IC 50 do radical encontrado para cada amostra, foi comparado com o valor padrão da rutina, onde é possível afirmar que os extratos apresentam baixa atividade antioxidante, confirmando os resultados obtidos pelo teste antioxidante qualitativo, sendo que a melhor atividade antioxidante foi a da fração de acetato de etila por ser um solvente polar, extrai mais compostos com grupamentos hidroxilas presentes em compostos fenólicos. O teste do teor de fenóis totais foi realizado com todas as amostras, onde foi possível observar que houve uma mínima alteração na coloração tendendo para o azul, o que indicou um baixo teor de fenóis. Na Tabela 2 estão apresentados os valores das absorbâncias, bem como a concentração de fenóis para cada extrato, para isso foi usado como padrão a curva do ácido gálico e os resultados são apresentados em µg de EAG (equivalentes de ácido gálico) por mg de extrato. Os polissulfetos cíclicos foram identificados em ambos os perfis cromatográficos (hidrodestilação e SPME) representados nas Figuras 2 e 3, apresentando porcentagem maior do composto 1,2,4-tritiolano em ambas as extrações. Foi identificado um total de 14 polissulfetos cíclicos, sendo 9 no método de hidrodestilação e 11 a partir da SPME, representando respectivamente, 77,2% e 76,4% da composição. Tabela 1. Valores do IC50 das amostras analisadas em µg/ml. Concentrações Extrato com Extrato com acetato de Extrato com hexano etila clorofórmio 1,25 mg/ml 5,37% 22,2% 4,3% 2,5 mg/ml 5,96% 23,2% 3,38% 5,0 mg/ml 7,30% 24,9% 5,51% 10 mg/ml 11,92% 26,5% 8,67% Tabela 2. Absorbâncias e concentrações das amostras analisadas. Fração hexânica Fração acetato de etila Fração Clorofórmio Absorbância (nm) Concentração (µg de EAG/mg de extrato) Figura 2: Perfil cromatográfico da composição volátil da Microlobius foetidus por HD. Figura 3: Perfil cromatográfico da composição volátil da Microlobius foetidus por SPME. Estudos Químicos e Biológicos da Microlobius foetidus

hidroxilas presentes em compostos fenólicos.

5 80 Os compostos majoritários identificados foram 1,2,4-tritiolano, 1,3,5-tritiano, 1,2,4- tritiolano-3,5-dimetil, 1,2,4,6-tetratiepano e 1,2,5,6-tetratiocano, nas quais as estruturas são apresentadas na Figura 4. O óleo obtido por hidrodestilação teve um rendimento de 0,24% com coloração amarela e um odor característico de alho. Polissulfetos cíclicos têm uma ocorrência restrita na natureza, com poucos relatos de ocorrência em plantas, o que torna esta espécie interessante sob das atividades biológicas. Figura 4: Estrutura dos principais polissulfetos cíclicos identificados. CONCLUSÕES Com os resultados obtidos no teste antioxidante qualitativo foi possível observar que os extratos da espécie Microlobius foetidus apresentam uma baixa atividade antioxidante, o que foi confirmado com o teste quantitativo, onde nenhuma amostra demonstrou-se altamente ativa frente ao DPPH, apresentando um IC 50 alto, comparado com a rutina, o que mostra a pouca atividade antioxidante dos extratos. Com o teste para determinar a quantidade de fenóis totais, observou-se que há um baixo teor de compostos fenólicos nas amostras, porém chama a atenção pelo fato dos extratos menos polares terem apresentados maior teor, despertando assim o interesse de estudos posteriores para identificar o porquê que isso aconteceu. As análises dos compostos voláteis das folhas obtidos pelos métodos hidrodestilação e SPME, em ambos foram identificados polissulfetos cíclicos, porém, algumas diferenças foram encontradas na composição química volátil, de acordo com o método de extração utilizado, o que indica uma provável decomposição de alguns polissulfetos durante o aquecimento no processo de hidrodestilação. AGRADECIMENTOS UEMS, CNPQ. REFERÊNCIAS SANTOS, A.F.; KALIL FILHO, A.N. Fungos associados às sementes de pau-alho (Microlobius foetidus subsp. Paraguensis). Boletim de Pesquisa Florestal (Colombo, PR), 42 (2001) SOUZA, C.M.M.; SILVA, H.R.; VIEIRA-JR, G.M.; AYRES, M.C.C.; COSTA, L.S.C.; ARAÚJO, D.S.; CAVALCANTE, L.C.D.; BARROS, E.D.S.; ARAÚJO, P.B.M.; BRANDÃO, M.S.; CHAVES, M.H. Fenóis totais e atividade antioxidante de cinco plantas. Química Nova, 30, 2 (2014)

Polissulfetos cíclicos têm uma ocorrência restrita na natureza, com poucos relatos de ocorrência em plantas, o que torna esta espécie interessante sob das atividades biológicas.

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